血凝抑制实验报告（通用3篇）
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血凝抑制实验报告（通用 3篇）
血凝抑制 告 篇实验报 1
一、原理
流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有 并吸附于 胞表面受体的识别 红细 结
构，HA 试验由此得名。HA 蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰 HA 蛋白与红细胞受体
的结合从而出现抑制现象。
二、应用
该试验是目前 WHO 进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株
HA 亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
三、缺点
只有当抗原和抗体 HA 亚型相一致时才能出现 HI 现象，各亚型间无明显交叉反应；除
鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝
集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。
四、试验步骤
1 阿氏（Alsevers）液配制
称量葡萄糖 2.05g、 檬酸柠 钠 0.8g、 檬酸柠0.055g、 化氯 钠 0.42g，加蒸馏水至
100mL，散热溶解后调 pH 值至 6.1，
69kPa 15min 高压灭菌，4℃保存备用。（3.8%枸橼酸钠（3.8g 枸橼酸钠，100ml 超纯
水），101 kPa,20min 高压灭菌，4℃保存备用,保存期 1个月）。
2 10%和1%鸡红细胞液的制备
2.1 采血
用注射器吸取阿氏液约 1mL（3.8%枸橼酸钠），取至少 2只SPF 鸡（如果没有 SPF
鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约 2～4mL，与阿氏液混合
（3.8%枸橼酸钠），放入装 10mL 阿氏液（生理 水）的离心管中混匀。盐
2.2 洗涤鸡红细胞
将离心管中的血液经 1500～1800 r/min 离心 8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液
（生理盐水），轻轻混合，再经 1500～1800 r/min 离心 8分钟，用吸管移去上清液及沉
淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复 2次以上 程后，加入阿氏液过20 mL（生理盐水），
轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过 5天。
2.3 10%鸡红细胞悬液
取阿氏液保存不超过 5天的 胞，在 形刻度离心管中离心红细 锥 1500～1800 r/min 8
分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入 9倍体积(mL)的生理盐
水，用吸管反复吹吸使生理 水与 胞混合均匀。（此步盐 红细
可省略，直接配制 1%红细胞）
2.4 1%鸡红细胞液
取混合均匀的 10%鸡红细胞悬液 1 mL，加入 9 mL 生理盐水，混合均匀即可。（根据
检测血清的数量，估算一下需要的 1%鸡红细胞量，可按 0.3ml/每份血清）
3 抗原血凝效价测定（HA 试验，微量法）
3.1 在微量反 板的应1孔～12 孔均加入 25μl PBS（生理盐水），换滴头。
3.2 吸取 25μl 抗原加入第 l孔，混匀。
3.3 从第 1孔吸取 25μl，病毒液加入第 2孔，混匀后吸取 25μl 加入第 3孔，如此进
行倍比稀释至第 11 孔，从第 11 孔吸取 25μl 弃之，换滴头。
3.4 每孔再加入 25μl PBS（生理盐水）。
3.5 每孔均加入 25μl 体积分数为 1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加
入）。
3.6 振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置 40min 后观察结果（如果环境温度太高，
可置4℃环境下反应 1小时）。对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。
3.7 结果判定 将板倾斜，观察血凝板，判读结果。
能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀 度 抗原的血凝效价，此释 为该
效价为 1个血凝 位（单HAU）。注意 照孔 呈 完全不凝集（对应 现 -），否 此次 无效。则检验
4 血凝抑制（HI） （微量法）试验
4.1 根据 3的试验结果配制 4HAU 的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为
终点，终点稀释倍数除以 4即为含4HAU 的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度
为1:256，则4HAU 抗原的稀释倍数应是 1:64（256 除以 4）。
4.2 在微量反 板的应1孔～11 孔加入 25μl PBS（生理盐水），第 12 孔加入 50μl
PBS（生理盐水）。
4.3 吸取 25μl 血清加入第 1孔内，充分混匀后吸 25μl 于第 2孔，依次倍比稀 至释
第10 孔，从第 10 孔吸取 25μl 弃去。
4.4 1 孔～11 孔均加入含 4HAU 抗原 25μl，室温（约 20℃）静置至少 30min。
4.5 每孔加入 25μl 1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约
20℃，若环境温度太高可置4℃条件下进行），对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。
4.6 结果判定
试验成立的条件：只有阴性对照孔血清滴度不大于21og2，阳性对照孔血清误差不超
过1个滴度， 果才有效。试验结
以完全抑制 4HAU 抗原的血清最高稀释倍数作为HI 滴度。
HI 价小于或等于31og2 判定 HI 试验阴性；HI 价大于或等于41og2 为阳性。
五、HI 试验注意事项
1、合理 抗原和 照阳性血清。选择 对 针对 Re-4 和Re-5 株疫苗免疫采用相应抗原和对
照阳性血清。
同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，
从而使 同一血清的 果有差 。一般来 ，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同 ，检测 结 别 讲时
则所测得的 HI 效价较高。
2、合理使用和保存抗原。反 要按 定保存和使用， 干的 按照 明中应试剂规冻试剂应说
规定的体积重新溶解并保存。要避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也
可与所有抗血清发生非特异反应。为避免反复冻融和细菌污染，可以无菌操作将试剂分装
成小包装。
3、反 温度不能太高。若在应37℃ （如温箱）下进行，
血凝抑制 告 篇实验报 2
随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检
测技术在临床应用的重要性。下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的
注意事项及操作方法。
用：应
用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄
的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。
下面以新城疫病毒为例，介绍血凝和血凝抑制试验的方法：
注意事项：
一、 本要具有代表性：所采 本要能代表整体，通常采用四角加中 的随机取样 样 间样
法，并且确定适当的样品数量，一般1000 只以下的 群采 率在鸡样2～5%；5000 只以下 1～
2%；5000 只以上 0.5～1%。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。方法
是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结
果。每只鸡采血量在 1ml 左右，最好不低于 1ml，在室温下静置至血清自然析出。
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血凝抑制实验报告（通用3篇）血凝抑制告篇实验报1 一、原理 流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有并吸附于胞表面受体的识别红细结构，HA试验由此得名。HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。 二、应用 该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。 三、缺点 只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时...
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作者：Jazy
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时间：2024-07-10
