血凝抑制实验报告（通用20篇）
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血凝抑制实验报告（通用 20 篇）
血凝抑制 告 篇实验报 1
禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗
群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所
普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并
能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测
和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规
范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程
中应注意的事项做一探讨。
一、 血凝试验操作程序
1、取 96 孔90°V 形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的 1~12 孔每孔加 25 μL
PBS 液。
2、吸取 25 μL 标准禽流感抗原加入到第一排第 1孔中充分混匀。
3、从第 1孔吸取 25 μL 混匀后的抗原液加到第 2孔中，混匀后吸取 25μL 加入到第
3孔中，依次 行倍比稀 至第二排最后一孔即第进 释 24 孔，最后弃去 25 μL。第三排孔至
第四排孔同上操作。
4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入 25 μL 1%的鸡红细胞悬液。
5、将酶标板置于微量振荡器上振荡 10 秒，室温（20-25℃）静置 30 min 观察结果
（如果环境温度太高，可置 4℃环境下）。
6、结果判定：将板作 45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。以完全凝集（不流
淌）的抗原或病毒最高稀释倍数为 1个血凝单位（HAU）
二、血凝抑制试验操作程序
1、根据血凝试验结果配制 4HAU 抗原。（即 1HAU 抗原除以 4）
2、取 96 孔V形酶标板，用移液器在第 1~12 孔各加入 25 μL PBS。
3、在第 1孔加入 25 μL 被检血清，充分混匀后移出 25 μL 加至第 2孔，依次 推，类
倍比稀释至第 12 孔，弃去 25 μL。
4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。
5、在第 1~12 孔各加入 25 μL 4 单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温 20-
25℃下静置 30 min。
6、每孔加入 25 μL 1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-
25℃）静置 40 min 后 察 果，若 境温度 高，可于观 结 环 过 4℃条件下进行，红细胞将呈明显
的纽扣状沉到孔底。
7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于 2 log2，阳性对照孔误差不超过1个
滴度，试验结果才有效。 将酶标板作 45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数
判为该血清的血凝抑制滴度。当被检血清效价大于等于 4log2，判为禽流感抗体阳性。
三、试验过程中的注意事项
1样品的保存及试验前处理
1.1 采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出
血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧烈震动。
1.2 一般情况下，在 5天内检测的样品可放置在 4℃的冰箱中冷藏，否则低温冷冻保
存。
1.3 在检测前血清样品应充分混匀，混匀时采用上下缓慢颠倒几次的方法即可，切忌
剧烈振荡而引起产生气泡及血清中蛋白变性。
1.4 对出现胶冻状的血清样品，可采用反复搅动几下再离心的方法有助于缓解该状
态。胶状物是含纤维蛋白和纤维蛋白原的血清，可能是由于放置时间不够造成的血清未完
全析出状态。不建议直接吸取其中少量的清亮血清。
1.5 水禽等样品为排除非特异性反应，还应相应进行灭能反应。具体操作方法：56℃
水浴锅 30min 或加等量 10%鸡红细胞，轻摇后静置 30 分钟，离心，收集上清液即可。
2器材的选择
2.1 酶标板的选择：
建议使用 96 孔90°V 型板进行试验，通过反复试验证明：90°V 型板相对于 110°板
及130°板来讲，具有红细胞沉降速度快，产生的凝集图像清晰、结果容易判定等优点。
2.2 移液枪的选择及使用：
①单道、多道可调微量移液枪应选择合适的量程，以便精确度的提高。
②使用时应采用一档吸液二档排液的方法。吸取液体时，枪头要深入液下缓慢平稳吸
液。加缓冲液时
应加在板孔底部。倍比稀释血清时，应每孔至少反复吹吸6次，以便混合均匀，还应
注意尽量避免产生泡沫引起混合不均。加抗原及红细胞时应在板内液面上方加样，以免交
叉污染，影响试验结果。
③加样、倍比稀释时应高度集中注意力，以免漏加、重复加样等。
3试剂的保存及配置
3.1 禽流感血凝抑制试验所用的抗原、阳性血清应严格按照说明书的要求进行保存和
配置，试验前应提前将其恢复至室内温。抗原的保存温度为-20℃，反复冻融会降低抗原
的滴度，应避免反复冻融。
3.2 PH7.2、0.01mol/L 的PBS 液的制备
①应尽量现用现配
②每次使用前应测 PH 值，以免时间过长而导致 PH 值发生改变。
③由于 PH 试纸跨度范围偏大，PH 值不易准确介定，因此最好采用酸度计准确测量 PH
值，以提高试验的精确度。
④全部试验均采用同一种稀释液。
3.3 1%红细胞的制备
①为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制 1%红细胞悬液时应最好选择采取
2-3 只SPF 鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。当然采血的前提条件是要按十分之
一采血量比例在一次性注射器中加入抗凝剂，如肝素、枸椽酸钠、柠檬酸钠等。
②采血完毕后最好分装至2ml 容量的圆底离心管中，因为通过 2ml 与1.5ml 两种容量
离心管相比 ，放入较1.5ml 尖底离心管中的话，离心后，离心管底部红细胞不易与加入的
PBS 液混匀，易沉积在管底部，达不到洗脱干净的目的。
③经20xx~3000r/min，5~10min，弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍
以上血量的 PBS 液，上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离
心弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明 止。为
④在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细
胞。
⑤制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。
3.4 抗原液的配制
①先做血凝试验测定效价，以抗原与红细胞完全凝集的孔为 1HUA 抗原，配制 4HUA 抗
原应往前推算两孔，即除以 4后的 。值
②每次做试验前，必须重新检测禽流感抗原的血凝效价，以免效价发生改变而导致抗
原稀释倍数不准确，从而导致试验结果不准确。
③为保证配制的抗原准确，还要进行抗原回滴试验。具体方法：做二排抗原回滴，在
两排的第 1~8 孔各加 25 微升PBS，取 4HAU 抗原 25 微升加在两排的第 1、第 2孔，混匀，
从第 2孔倍比稀 至第释4孔，弃去 25 微升，另一排同样。从第 2至第 8孔补25 微升PBS，
以保持 75 微升总量不变，另一排同样。两排的第 1至第 8孔各加 25 微升1%红细胞，震荡
10 秒 。静置钟30 分钟观察结果。这样在第 1孔为4HAU 抗原，第 2孔为2HAU 抗原，第 3孔
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血凝抑制实验报告（通用20篇）血凝抑制告篇实验报1 禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。 一、血凝试验操作程序 1、取96孔90°V形酶标板，...
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作者：littere...
分类：实用范文
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时间：2024-08-15
