血凝抑制实验报告（通用4篇）

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血凝抑制实验报告（通用 4篇）

血凝抑制告篇实验报 1

　　随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检

测技术在临床应用的重要性。下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的

注意事项及操作方法。

　　应用：

　　用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄

的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。

　　注意事项：

　　一、样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常采用四角加中间的随机取样

法，并且确定适当的样品数量，一般 1000 只以下的鸡群采样率在 2～5%；5000 只以下 1～

2%；5000 只以上 0.5～1%。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。方法

是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结

果。每只鸡采血量在 1ml 左右，不低于 1ml，在室温下静置至血清自然析出。

　　二、四单位抗原的准确性：要获得准确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得

抗原的血凝价，尔后前移 2孔作为四单位抗原的稀释度。

　　三、红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用的红血球应来源于非疫苗免疫过

的健康公鸡，但实际上却多采用免疫过疫苗的健康公鸡，有时甚至是病鸡。因此，对红血

球的洗脱的次数要多、要充分，并注意转速和时间，通常采用五次变速离心法：前四次为

每分钟 1500 转，每次 5分钟，最后一次为每分钟 3000 转，持续 7～8分钟。另外，洗红血

球过程中，应注意动作要轻，玻璃仪器之间尽量减少碰撞，以免造成红血球破裂而影响结

果。

　　四、结果判定的及时性：检测中，每次试验均应设抗原与生理盐水对照，加入红血球

后，每隔5分钟观察一次，一旦两列对照孔图像清晰地显示出来时，应立即对样本进行结

果判定，过早过晚都会影响判定结果的准确性。

　　血凝与血凝抑制试验的操作方法：

　　一、材料与仪器：新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心

机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96 孔V型医用血凝板、微量移

液器、微量振荡器、恒温培养箱、冰箱等。

　　二、方法：

　　 1%鸡红血球的制备：

　　 1.用长针刺入鸡心脏或翅下静脉，采血，采血量视用量而定，5%抗凝剂与全血的比例

为1∶3～4。

　　 2.洗血球：共洗4～5次，每次 5～8分钟，红血球与生理盐水的比例至少为 1∶2～

3。离心机转速为每分钟 1500～3000 转，最后倾去上清。

　　 3.吸红血球泥1ml 加生理盐水 99ml，配成1%红血球备用。

　　三、血凝试验：

　　 1.血凝板上12 个孔内全部加入生理盐水，每孔 0.05ml，吸等量新城疫抗原于第一孔

内，混匀后吸出同量于第二孔内混匀，以此类推稀释至第11 孔，并弃去 0.05ml，留第 12

孔作为生理盐水对照，然后全部孔内加入1%鸡红血球。

　　 2.将血凝板置于振荡器上振荡 1～2分钟，使材料充分混均，放入恒温培养箱，每 5

分钟观察一次，至 10～15 分钟取出，一般以生理盐水对照孔的图象清析地出现为准。

　　 3.结果判定：红血球在反应板底部全部均匀铺开为完全凝集（++++），在血凝板底部

集为一小红点为沉淀（－），如底部为一小红点，四周为凝集的红细胞，则为不完全凝集

（++）。

　　 4.出现完全凝集的抗原的稀释度，即为该抗原的凝集价。

　　 5.四单位抗原的制备：血凝试验的结果如为28（256），前移则2孔即 26（64），作

为四单位抗原的稀释度。即：63ml 生理盐水+1ml 抗原即为四单位抗原。

　　四、血凝抑制试验：

　　 1.血凝板上1～11 孔全部加入0.05ml 的生理盐水，于第一孔内加入等量的被检抗

体，稀释至第10 孔，弃去 0.05ml，再加入等量的 4单位新城疫抗原至第11 孔，第11 孔

为抗原对照，12 孔为生理盐水对照。在振荡器上振荡 1～2分钟，放置室温约20 分钟，然

后加入等量的 1%鸡红血球，振荡后放入恒温培养箱大约10～15 分钟后进行结果判定。

　　 2.结果：能完全抑制红细胞凝集的被检抗体的稀释度为该被检抗体的血凝抑制滴度。

　　注：1、HI 价在 23～24 时免疫可产生良好的免疫应答，如在疫区可提高到 24～25 免

疫。

　　 2、24～25

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